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高效液相色譜法是在經(jīng)典色譜法的基礎(chǔ)上,,引用了氣相色譜的理論,在技術(shù)上,,流動(dòng)相改為高壓輸送(最高輸送壓力可達(dá)4.9´107Pa);色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成,,從而使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜(每米塔板數(shù)可達(dá)幾萬或幾十萬);同時(shí)柱后連有高靈敏度的檢測(cè)器,,可對(duì)流出物進(jìn)行連續(xù)檢測(cè),。
高效液相色譜的特點(diǎn):
1.高壓:液相色譜法以液體為流動(dòng)相(稱為載液),液體流經(jīng)色譜柱,,受到阻力較大,,為了迅速地通過色譜柱,必須對(duì)載液施加高壓,。一般可達(dá)150~350×105Pa,。
2.高速:流動(dòng)相在柱內(nèi)的流速較經(jīng)典色譜快得多,一般可達(dá)1~10ml/min,。高效液相色譜法所需的分析時(shí)間較之經(jīng)典液相色譜法少得多,,一般少于 1h 。
3.高效:近來研究出許多新型固定相,,使分離效率大大提高,。
4.高靈敏度:高效液相色譜已廣泛采用高靈敏度的檢測(cè)器,進(jìn)一步提高了分析的靈敏度,。如熒光檢測(cè)器靈敏度可達(dá)10-11g,。另外,用樣量小,,一般幾個(gè)微升,。
5.適應(yīng)范圍寬:氣相色譜法與高效液相色譜法的比較:氣相色譜法雖具有分離能力好,,靈敏度高,分析速度快,,操作方便等優(yōu)點(diǎn),,但是受技術(shù)條件的限制,沸點(diǎn)太高的物質(zhì)或熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)都難于應(yīng)用氣相色譜法進(jìn)行分析,。而高效液相色譜法,,只要求試樣能制成溶液,而不需要?dú)饣?,因此不受試樣揮發(fā)性的限制,。對(duì)于高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差,、相對(duì)分子量大(大于 400 以上)的有機(jī)物(這些物質(zhì)幾乎占有機(jī)物總數(shù)的 75% ~ 80% )原則上都可應(yīng)用高效液相色譜法來進(jìn)行分離,、分析。據(jù)統(tǒng)計(jì),,在已知化合物中,,能用氣相色譜分析的約占20%,而能用液相色譜分析的約占70~80%,。